“M型峰”是色譜分析中一個(gè)常見(jiàn)的術(shù)語(yǔ),通常指在色譜圖上一個(gè)色譜峰呈現(xiàn)出‘M’字形的分布,即在一個(gè)大峰內(nèi)出現(xiàn)兩個(gè)尖峰,中間有個(gè)低谷,整體外形類(lèi)似英文字母M。
一、M型峰的定義 M型峰(Mshaped peak): 是指一個(gè)色譜峰頂部分裂為兩個(gè)(或多個(gè))小峰,在峰頂出現(xiàn)谷底狀,整個(gè)輪廓像英文字母"M"。
二、M型峰出現(xiàn)的原因 產(chǎn)生M型峰的根本原因是:應(yīng)該只出現(xiàn)一個(gè)組分的色譜峰,卻因某些物理、化學(xué)或系統(tǒng)問(wèn)題導(dǎo)致兩個(gè)(或更多)信號(hào)并列、疊加,且不能完全分離。
常見(jiàn)原因如下: 1. 對(duì)映體/異構(gòu)體未完全分離(亞分離) 手性色譜中,分析DL體、手性異構(gòu)體等,當(dāng)兩對(duì)映體保留時(shí)間極為接近(分離度小于1.0),而儀器、條件又使兩峰部分疊加、沒(méi)有分開(kāi)時(shí),會(huì)形成一個(gè)中部下陷的“肩”——即M型峰。 此時(shí),兩個(gè)物質(zhì)的峰未完全分開(kāi),但儀器能“分辨”出每一個(gè)的信號(hào)貢獻(xiàn)。
2. 流動(dòng)相或色譜柱不均勻/柱效下降 色譜柱老化、填料不均或柱內(nèi)徑變形,會(huì)導(dǎo)致樣品通過(guò)色譜柱時(shí)流路改變,部分樣品先流出、部分后流出,最終造成峰形分裂。
3. 樣品溶液不均勻/進(jìn)樣問(wèn)題 樣品溶液中可能存在微小聚集體、析出或混溶性問(wèn)題;進(jìn)樣過(guò)程中存在氣泡、分層等異常,也會(huì)導(dǎo)致樣品分成兩批被檢測(cè),從而雙峰合一。
4. 檢測(cè)器異常/信號(hào)漂移 檢測(cè)器靈敏度異常、信號(hào)漂移等偶爾也能造成M型峰,但這種情況較少且容易排查。
5. 溶劑前后峰(溶劑參與作用) 由于樣品溶解溶劑和流動(dòng)相不相容,可能有一部分樣品在溶劑和流動(dòng)相環(huán)境中保留行為不同——部分快跑、部分慢跑,出現(xiàn)M型峰。
三、實(shí)際案例
1. 手性拆分內(nèi)標(biāo)檢測(cè) 例如DL苯丙氨酸的手性拆分,如果柱子選擇性有限,R和S異構(gòu)體極度接近,色譜峰中間“陷下去”就是M型峰。 2. 蛋白峰檢測(cè) 被吸附/解吸導(dǎo)致部分分子流出時(shí)間分歧,出現(xiàn)分裂。
四、如何解決M型峰問(wèn)題? 1. 增加色譜柱的分辨率(如降低流速、換更長(zhǎng)的色譜柱); 2. 優(yōu)化流動(dòng)相組成和比例(如降低或增加有機(jī)百分比); 3. 優(yōu)化色譜溫度和檢測(cè)波長(zhǎng); 4. 檢查樣品溶解度與進(jìn)樣方式,確保進(jìn)樣均勻,避免氣泡和分層; 5. 更換色譜柱或清洗(如懷疑柱損壞或堵塞); 6. 對(duì)峰做簡(jiǎn)化分析時(shí)考慮用數(shù)學(xué)擬合(分峰)操作。
五、小結(jié)
> M型峰的本質(zhì),是由于兩個(gè)或多個(gè)相近成分共流出,但分離度不夠,峰型相互疊加導(dǎo)致的現(xiàn)象。 也可能涉及儀器、溶液、進(jìn)樣和柱狀況等系統(tǒng)性問(wèn)題。適當(dāng)優(yōu)化色譜條件或采用分峰處理,可大幅減輕M型峰現(xiàn)象。 如你具體是哪個(gè)分析的M型峰,可補(bǔ)充色譜條件或相關(guān)譜圖,便于更針對(duì)性診斷! |